Identifikasi Bakteri Secara Morfologi dan Biokimia

identifikasi bakteriSalah satu tehnik dalam identifikasi bakteri adalah melihat kenampakan morfologi dan hasil uji biokimia yang dilakukan terhadap bakteri tersebut.

Identifikasi morfologi bakteri dapat dilakukan dengan menggunakan cat gram. Caranya adalah :

  1. Satu ose kultur bakteri diratakan di atas gelas benda, dikeringanginkan dan difiksasi di atas nyala lampu spiritus.
  2. Selanjutnya ditetesi dengan cat gram A dan dibiarkan selama 1 menit lalu dicuci dengan air mengalir dan dikeringanginkan.
  3. Kemudian ditetesi dengan gram B selama 1 menit lalu dicuci dan dikeringanginkan.
  4. Selanjutnya ditetesi dengan gram C selama 30 detik lalu dicuci dan dikeringanginkan.
  5. Yang terakhir ditetesi dengan gram D, dibiarkan selama 1-2 menit lalu dicuci dan dikeringanginkan. Preparat yang didapatkan selanjutnya diamati dibawah mikroskop.

Sedangkan untuk identifikasi bakteri secara biokimia ada 6 macam yang bisa anda lakukan. Yaitu

Uji Fermentasi Karbohidrat

Uji fermentasi karbohidrat yang dilakukan antara lain uji fermentasi glukosa, fruktosa, laktosa, sukrosa, maltosa, mannosa, dan mannitol. Sebanyak 1 ose bakteri isolat diinokulasi pada 7 ml media NB dalam tabung reaksi yang telah ditambahkan 0,5% karbohidrat yang akan diuji, indikator phenol red dan telah diberi tabung durham. Inkubasi selama 24-48 jam. Kemudian mengamati perubahan warna yang terjadi. Apabila media pertumbuhan yang berwarna merah berubah menjadi kekuningan, menandakan bakteri isolat tersebut mampu memfermentasi karbohidrat tersebut (menghasilkan asam). Apabila terdapat gelembung udara dalam tabung durham, maka dihasilkan gas CO2 (hasil fermentasi).

Uji katalase

Kultur bakteri dalam agar miring diambil menggunakan ose lalu diletakkan ke gelas benda. Selanjutnya ditetesi dengan larutan H2O2. Gelembung udara yang muncul pada kultur tersebut menunjukkan terjadi reduksi H2O2 oleh enzim katalase yang dihasilakan isolat bakteri tersebut.

Uji kemampuan menghidrolisis pati

Kemampuan menghidrolisis pati diuji dengan mengkulturkan isolat bakteri secara goresan (streak plate) pada permukaan media Pati agar, diinkubasi pada suhu kamar selama 48 jam. Kemampuan isolat menghidrolisis pati ditunjukkan dengan adanya zona jernih di sekitar koloni yang tumbuh. Untuk meyakinkan kemampuan tersebut kultur bakteri ditetesi larutan iod. Mengamati terbentuknya Zona jernih di sekitar koloni yang merupakan aktivitas bakteri isolat tersebut mampu hidrolisis pati atau aktivitas amilolitik oleh enzim amilase.

Uji kemampuan Pembentukan Indol

Isolat bakteri diinokulasikan sebanyak 1 ose dalam tabung reaksi yang berisi medium NB dan diinkubasikan pada temperatur kamar (37oC) selama 48 jam. Lalu ditambahkan ether secara hati-hati kemudian digojog. Selanjutnya campuran tersebut didiamkan sampai terbentuk 2 lapisan. Kemudian ditambahkan 0,5 ml larutan reagen Erlich melalui tepi tabung dengan hati-hati dan dibiarkan beberapa saat. Selanjutnya mengamati adanya cincin merah diantara kedua lapisan medium dan ether yang menandakan terbentuknya indol.

Uji kemampuan mereduksi Nitrat

Isolat bakteri diinokulasikan dalam tabung reaksi berisi medium nitrat cair dan diinkubasikan pada temperatur kamar (37oC) selama 48 jam. Kemudian ditambahkan 1 ml asam sulfanilat (larutan A) dan 1 ml larutan alpha naftilamin (larutan B), lalu digojog sampai rata. Apabila warna berubah menjadi merah berarti terbentuk nitrit.

Uji aktivitas selulase

Kultur bakteri diinokulasikan pada permukaan medium CMC agar dan diinkubasikan pada suhu 37oC selama 48 jam. Setelah ditumbuhi bakteri, dituangi dengan indikator Congo red dan didiamkan dselama 15 menit hingga terjadi perubahan pada biakan. Larutan Congo Red dalam media CMC agar tersebut dibuang dan dicuci dengan NaCl. Apabila terbentuk zona jernih di sekitar koloni, berarti terdapat aktivitas selulase (bakteri menghasilkan enzim selulolitik).

Hasil dari uji morfologi dan biokimia ini kemudian dicocokkan dengan data yang ada di Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, sehingga kemudian anda bisa mengidentifikasi bakteri yang anda punya.

You may also like...

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *